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学习诊断 微生物的培养•01 02 自主学习

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三、核心名词

1.液体培养基:培养基中不加入任何凝固剂,成分均匀,微生物能充分接触和利用培养基中养料,适于生理研究。发酵效率高,操作方便,常用于发酵工业。

2.固体培养基:含有凝固剂(如琼脂、明胶、硅胶等)的培养基。常用于微生物的分离、鉴定、计数和菌种保存等。

3.培养基成分:碳源(提供碳元素的物质)、氮源(提供氮元素的物质)水和无机盐。有些微生物生长还需要生长因子。

4.消毒:用较为温和的方式杀死物体表面或内部的部分微生物(不包括芽孢和孢子)的方法。

5.灭菌:用强烈的理化因素杀灭或去除物体上所有微生物的方法,包括抵抗力极强的芽孢和孢子。

6.平板划线法:通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面,在数次划线后培养,可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体,这就是菌落。

7.稀释涂布平板法:将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面,进行培养。在稀释度足够高的菌液里,聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞,从而能在培养基表面形成单个的菌落。

8.选择培养基:在普通培养基中加入特殊营养物质或化学物质,以抑制不需要的微生物的生长,有利于所需微生物的生长。用于将某种或某类微生物从混杂的生物群体中分离出来。

9.鉴别培养基:在培养基中加入某种试剂或化学药品,使微生物经过培养后发生某种变化,从而区别不同类型的微生物。

10.菌落特征:在一定的培养条件下,培养基中的同种微生物经常表现出稳定的菌落特征:包括菌落形状、大小、隆起程度和颜色等。

11.纤维素酶:是一种复合酶,一般认为它至少包含三组成分,即C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶,前两种酶使纤维素分解为纤维二糖,第三种酶将纤维二糖分解为葡萄糖。

*12.湿热灭菌法:可杀灭包括芽孢在内的所有微生物,是灭菌效果最好,应用最广的灭菌方法。将物品置于高压蒸汽灭菌锅中,在压力100 kPa,121摄氏度维持20分钟左右。

*13.巴氏消毒法:60-65摄氏度加热30 min,或者72摄氏度加热15 s,可以杀死乳制品中的链球菌、沙门氏菌、布鲁氏菌等病原菌,但仍保持乳制品中不耐热的成分不被破坏。

*14.斜面接种:挑取少量菌种接种到另一空白斜面培养基上的方法,将接种环上的少量菌种,通过在斜面培养基上划线,使菌体附于培养基。

*15.穿刺接种:用来接种厌氧菌、检查细菌运动性或保藏菌种的接种方法。用接种针蘸取少量的菌种,沿着半固体培养基中心向管底作直线穿刺。

*16.菌种保藏:根据微生物的生理生化特性,认为地创造条件,使微生物处于代谢不活泼、生长繁殖受抑制的休眠状态,以减少菌种的变异。一般通过降低培养基营养成分、低温、干燥或缺氧等方法,达到防止突变、保存纯种的目的。

*17.血球计数法:用以对人体内红、白血球进行显微计数之用,也常用于计算一些细菌、真菌、酵母等微生物的数量,是一种常见的生物学工具。血球计数板上有划好的小格子,计数区的高度一般是0.1mm,这样就能计出一定容积样品中的细菌数量。

*18.抗性筛选:通过在培养基中加入某种抗生素等药物,只有能抵抗该药物的微生物才能生存,达到筛选的目的。

*19.营养缺陷筛选:在培养基中少添加入某种物质,比如组氨酸His,这样的培养基就是His-培养基,只有能合成His的微生物才能正常正常,缺少His基因的个体不能生长,达到筛选的目的。

*20.超净工作台:通过风机将空气过滤,以垂直或水平气流的状态送出,使操作区域达到一定洁净度。

*21.初级代谢产物:初级代谢产物是指微生物通过代谢活动所产生的、自身生长和繁殖所必需的物质,如氨基酸、核苷酸、多糖、脂类、维生素等。

*22.次级代谢产物:指生物生长到一定阶段后通过次级代谢合成的分子结构十分复杂、对该生物无明显生理功能,并非是该生物生长和繁殖所必需的小分子物质,如抗生素、毒素、激素、色素等。

四、概念模型

五、重难原理

1.为什么微生物培养需要无菌技术,区别灭菌和消毒,并举出常见的灭菌和消毒方法。

因为要防止外来微生物的污染。灭菌是用强烈的理化因素杀灭或去除物体上所有微生物的方法,包括抵抗力极强的芽孢和孢子。消毒是用较为温和的方式杀死物体表面或内部的部分微生物(不包括芽孢和孢子)的方法。

常见的灭菌方法有:干热灭菌,灼烧、干拷等;湿热灭菌,高压蒸汽灭菌等。常见消毒方法,如拿酒精擦拭等。

2.固体培养基的制备流程是怎样的?写出简要步骤。

计算→称量→溶化→灭菌→倒平板

计算:根据配方计算各成分用量;

称量:准确称量各种成分;

溶化:加入水和琼脂加热熔化;

灭菌:培养基转移到锥形瓶,加棉塞,包上牛皮纸,放入灭菌锅;

倒平板:待培养基冷却到50摄氏度左右,在酒精灯附近倒平板。

3.平板划线法和稀释涂布平板法有什么区别?

平板划线法是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面,在数次划线后培养,可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体。稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面,进行培养。

两种方法都可以用于微生物菌种的纯化和分离,稀释涂布平板法还可以用于微生物的计数。

4.微生物培养需要注意哪些培养条件?

         微生物培养需要给微生物提供碳源、氮源、水和无机盐,并且pH要适宜,温度要适宜。

5.如何从土壤取样分离微生物以及如何来稀释取来的土壤样品?

土壤中微生物大约70-90%是细菌,细菌主要在潮湿土壤中生长,主要分布在距离地表3-8cm的土壤层。一般要铲去表层土,再采集。

制备土壤稀释液准确称取土样10g,加入装有90ml无菌水并带有玻璃珠的三角瓶中,振荡约20min,使土样与水充分混匀,将细胞分散。用一支无菌吸管从中吸取1ml土壤悬液加入装有9ml无菌水的试管中,吹吸3次,让菌液混合均匀,即成10-2稀释液;再换一支无菌吸管吸取10-2稀释液1 ml,移入装有9ml无菌水的试管中,也吹吸三次,即成l0-3稀释液;以此类推,连续稀释,制成一系列稀释菌液

6.土壤中分解尿素的细菌的分离原理以及步骤?

培养基的氮源为尿素,只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素,以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素,缺乏氮源而不能生长发育繁殖,而受到抑制,所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。

(1)土壤取样

(2)制备培养基:制备以尿素为唯一氮源的选择培养基。

(3)样品的稀释:分离不同的微生物采用不同的稀释度。原因:不同微生物在土壤中含量不同。目的:保证获得菌落数在30~300之间、适于计数的平板。

(4)取样涂布:实验时要对培养皿作好标记。注明培养基类型、培养时间、稀释度、培养物等。

(5)微生物的培养与观察:在菌落计数时,每隔24h统计一次菌落数目。选取菌落数目稳定时的记录作为结果,以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目

7.如何鉴定是否分离得到了分解尿素的细菌?

在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。培养某种细菌后,如果PH升高,指示剂将变红,说明该细菌能够分解尿素。

8.分解纤维素的微生物的分离步骤?

(1)土壤取样:生物与环境的互相依存关系,在富含纤维素的环境中纤维素分解菌的含量相对提高,因此从这种土壤中获得目的微生物的几率要高于普通环境。

(2)选择培养:增加纤维素分解菌的浓度,以确保能够从样品中分离所需要的微生物。

(3)梯度稀释:将选择培养后的培养基进行等比稀释101~107倍。

(4)将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上。

9.如何鉴定你是否分离得到了分解纤维素的微生物?

刚果红可以与纤维素形成红色复合物,当纤维素被纤维素酶催化分解后红色复合物无法形成,培养基上就会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈。

*10.简述培养基中碳源、氮源、无机盐以及生长因子的作用?

碳源:微生物生长的营养物质,是含碳化合物,为微生物生长代谢提供能量。

氮源:为生物体合成蛋白质、核酸及其他含氮化合物提供原料。

无机盐:为微生物生长提供各种元素。

生长因子:微生物生长不可缺少的微量有机物,包括微生物、嘌呤等。

*11.举例说明选择培养基和鉴别培养基的用途和原理?

选择培养基是在普通培养基中加入特殊营养物质或化学物质,以抑制不需要的微生物的生长,有利于所需微生物的生长。用于将某种或某类微生物从混杂的生物群体中分离出来。如利用纤维素为唯一碳源的培养基,选择出分解纤维素的细菌。

而鉴别培养基是在培养基中加入某种试剂或化学药品,使微生物经过培养后发生某种变化,从而区别不同类型的微生物。如在纤维素培养基中加入刚果红,来鉴定菌株确实分解了纤维素。

*12.比较干热灭菌法和湿热灭菌法, 并说明为什么湿热灭菌能在较低温度的条件下达到干热灭菌的灭菌效果?

(1)湿热中蛋白吸收水分,更易变性;(2)湿热的蒸汽投射力强,容易传递热能。(3)蒸汽有汽化热存在,每1g水由气态变成液态可释放529卡热能,可迅速提高物体温度。

*13.举例说明紫外线消毒的原理及应用?

利用200-300nm的紫外线,使DNA链上相邻的两个T共价结合成二聚体,阻碍DNA转录,导致微生物变异或死亡。一般用于手术室、病房等环境的空气消毒。

*14.常见的菌种保藏的方法有哪些?原理是什么?

常见方法有:斜面保藏法、沙土管干燥保藏法、真空冷冻干燥保藏法、液氮保藏法、悬液保藏法、甘油管法等。基本原理是利用微生物的生理生化特性,人为地创造条件,使微生物处于代谢不活跃、生长繁殖受到抑制的休眠状态,以减少菌种的变异,可通过降低培养基的营养成分、低温、干燥或缺氧等方法。

*15.简述血球计数板的使用过程及原理?

         利用血球计数板在显微镜下直接计数,是一种常用的微生物计数方法。将经过适当稀释的菌悬液放在血球计数板载玻片与盖玻片之间的计数室中,在显微镜下进行计数。由于计数室的容积是一定的(0.13),所以可以根据在显微镜下观察到的微生物数目来换算成单位体积内的微生物总数目。由于此法计得的是活菌体和死菌体的总和,故又称为总菌计数法。

         计数室的刻度一般有两种规格,一种是一个大方格分成16个中方格,而每个中方格又分成25个小方格,共400小格;另一种是一个大方格分成25个中方格,而每个中方格又分成16个小方格,总共也是400小格。所以无论是哪种规格的计数板,每一个大方格中的小方格数都是相同的。每一个大方格边长为1㎜,则每一大方格的面积为12,盖上盖玻片后,载玻片与盖玻片之间的高度为0.1㎜,所以计数室的容积为0.13



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